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高效消泡劑分解法生產(chǎn)核酸類物質(zhì)

分類:行業(yè)新聞 發(fā)布時(shí)間:2012-10-09 瀏覽量:11

與動(dòng)植物相比,微生物含有豐富的RNA,據(jù)記載,細(xì)菌的RNA含量為0.3%-5.1%,酵母為2.7%-11%,霉菌為0.7%-2.8%。目前都以酵母與高效消泡劑為主。這是由于酵母含RNA高,DNA的量較少,細(xì)胞易收集,抽提RNA容易,提取RNA后的菌體蛋白有再利用的價(jià)值,可以在低廉的碳源(如糖蜜、亞硫酸紙漿廢液等)上生長,另外,還可直接收集啤酒發(fā)酵的廢酵母作原料。現(xiàn)已用酵母與高效消泡劑的原料生產(chǎn)單核苷酸為例,說明分解法的大致過程。隨著使用高效消泡劑分解法核酸類物質(zhì)生產(chǎn)的需要,有關(guān)提高酵母體內(nèi)RNA含量的研究不斷有所報(bào)道,綜合起來有下列幾個(gè)方面,可供參考。
 ①選擇最適的培養(yǎng)條件。
 ②使用高效消泡劑分解法分離選育高產(chǎn)RNA的菌株。
 ③應(yīng)在具有活性蛋白的對(duì)數(shù)生長期進(jìn)行收獲。
 ④在氮、磷含量高的培養(yǎng)基中生長。
 ⑤Cu2+,Zn2+,F(xiàn)e2+對(duì)產(chǎn)朊假絲酵母與高效消泡劑中增加RNA有效。
 ⑥某些抗菌素如殺稻瘟素s、茴香霉素對(duì)假絲酵母和釀酒酵母有增加RNA的效果。
 ⑦采用Woldhof型或空氣提升式發(fā)酵罐對(duì)增加RNA有效。
酵母培養(yǎng)后,用離心及高效消泡劑等方法收集菌體,然后抽提RNA。從酵母抽提RNA的方法很多,如使用食鹽水、堿、十二烷基磺酸鈉、二甲苯磺酸、苯酚等。工業(yè)上主要有三種方法,即稀堿法、低鹽低堿法和熱鹽法。稀堿法:用相當(dāng)于1% NaOH在16-20℃下攪拌抽提50 min中和,加熱9 0℃10 min,立即降至3-4℃沉淀2天。
  低鹽低堿混合法:NaCl 3%-4%,NaOH 0.5%-0.15%,90 ℃保溫3h。酵母菌液濃度為10%。
  熱食鹽水抽提是利用高濃度的鹽溶液與高效消泡劑改變酵母細(xì)胞壁的滲透性,加熱后使核酸自細(xì)胞內(nèi)釋出。
核酸類的生產(chǎn),始于食品助鮮劑的制造,當(dāng)肌苷酸(IMP)、鳥苷酸(GMP)、黃苷酸( XMP)的鈉鹽和谷氨酸鈉鹽共存時(shí),對(duì)鮮味強(qiáng)度有顯著增加,具有相乘的效果。目前各國都在大力研制IMP和GMP,以便用于配制強(qiáng)力味精。AMP,ADP,ATP,ITP,GTP等鈉鹽與谷氨酸鈉之間也有協(xié)同作用。現(xiàn)已用發(fā)酵法或酶法及高效消泡劑分解法進(jìn)行研究或生產(chǎn)的有下列幾種:嘌呤核苷類有肌苷、鳥苷、腺苷、黃苷等。嘌呤核苷酸類有5'-肌苷酸(5'-AMP)、5'-鳥苷酸(5'-GMP)、5'-黃苷酸(5'-XMP)和5'-腺苷酸(5'-AMP)等。嘧啶核苷酸類物質(zhì)與高效消泡劑的研究,以乳清酸和乳清核苷為主。核酸衍生物類有環(huán)狀腺苷酸(cAMP)、腺三磷(ATP)、輔酶A、輔酶I(NAD)、黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)、CDP一膽堿等。許多核酸衍生物是重要的醫(yī)藥品,如咖啡因黃嘌呤衍生物、核酸類維生素及輔酶核酸類抗腫瘤藥物,核酸還能誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素,還有相當(dāng)數(shù)量的核酸類抗生素。因此,核酸類物質(zhì)的用途日漸增多。核苷酸類物質(zhì)的使用高效消泡劑生產(chǎn)方法大致有以下幾種:
  ①酶或化學(xué)法降解核酸:包括用微生物酶水解酵母RNA,內(nèi)酶降解內(nèi)源RNA,化學(xué)水解RNA為核苷酸和磷酸。
  ②抽提法:即抽提細(xì)胞內(nèi)核酸庫和游離的核苷酸。
  ③直接發(fā)酵:包括發(fā)酵生產(chǎn)核苷,然后磷酸化,發(fā)酵生產(chǎn)5'-核苷酸,由堿基發(fā)酵合成5'-核苷酸。
本文參考《發(fā)酵微生物學(xué)》一書。

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